1.樣品準備
首先，需要收集大鼠的血液樣品，并將其離心分離出血清。若使用其它生物樣品，需進行相應的處理步驟，如細胞培養上清、組織勻漿等。處理過的樣品可以在-20℃的低溫下保存。
2.試劑制備
根據試劑盒說明書中的指導，將所需的試劑按比例混合制備好，注意不同試劑之間的混合順序和稀釋倍數以及反應體系的pH值等因素。
3.樣品添加
將準備好的血清樣品加入到試劑盒提供的微孔板中，每個孔位加入適量的樣品(一般為50ul)，并加入基礎液等試劑調節稀釋系數以達到所需濃度范圍。
4.反應
加入樣品后，在37℃恒溫箱內孵育一定時間(約30分鐘至1小時)，使樣品中的游離脂肪酸與試劑中的抗體形成特異性免疫反應。
5.洗滌
將試劑盒提供的洗滌緩沖液加入孔位中，通過洗滌去除未結合的物質和噪音信號，每個孔位需重復洗滌3-4次。
6.顯色
加入顯色底物反應溶液，在室溫下靜置一定時間，使產生特定顏色反應，約10-30分鐘后即可進行測定。
7.測定
使用酶標儀等設備對所形成的顏色反應進行吸光度讀數，并通過標準曲線計算出樣品中游離脂肪酸的含量。
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